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台面匹配 - 为您的实验找到合适的缓冲区

台面匹配 - 为您的实验找到合适的缓冲区

缓冲区通常被视为理所当然,但它们可以制造或打破实验。在以前的帖子中,我们谈到了广泛的缓冲区可用于生物学研究和“良好”缓冲区的特征。

有机缓冲液不是惰性!它们可以与您的实验分子相互作用,或由于温度和离子浓度的变化而改变pH值。那么你如何找到合适的缓冲区你的实验?甚至在不断变化的温度,离子优势和其他变量的情况下,您如何确保您将保持适当的pH值,即使在变化的温度,离子优势和其他变量

一个人必须明智地选择挑选正确的缓冲区。以下是在寻找完美的缓冲区伴侣时考虑的几个因素。

进入正确的pH范围

首先,确定测试环境的最佳pH值,并在测试的一个pH单位内选择具有PKA值的缓冲区。虽然通常使用超过20个缓冲液,但很少有重叠的最佳pH范围,并且它们都没有最佳pH范围大于2个pH单位。例如,PIPPS的范围从约6.9到9.2,而CHE的范围为约8.6到10.0。

看蛋白质活动?请记住,酶仅在非常有限的pH范围内工作,有机缓冲液可以抑制或促进酶活性。您可以首先尝试像PIPPS,TAPS或Ches等更广泛的缓冲区,然后使用较窄的水平缓冲区来排除对实验的任何缓冲效果。

根据您的协议选择缓冲区

您的具体实验方法可以确定要使用什么类型的缓冲区。例如,如果使用错误的缓冲液,蛋白质的分离或纯化可以产生假阳性结果。阳离子缓冲液(如TRIS)可用于阴离子交换色谱,而MES或磷酸盐,即阴离子缓冲液,对阳离子交换色谱较好。含有哌嗪环(如HEPES或管子)的一些良好缓冲液可以形成自由基,因此对氧化/还原反应的实验并不是非常有帮助。

设置pH值

缓冲剂仅仅是酸和共轭碱。在制作缓冲区时,您需要在实验中获得正确的缓冲区浓度,并校准实验的pH值。通常使用NaOH / KOH或HCl完成,校准涉及慢慢添加酸或碱时搅拌。现在有什么伟大的是桌子告诉你任何给定的pH的正确量的酸/盐和碱/盐 - 只是查找你的pH的量并加入它!

现在,专注

通常,良好的靶缓冲浓度应在10至25mm之间。然而,有效的缓冲能力可以仅在25mm以上的浓度下进行。与此同时,您不希望浓度和离子优点太高,因为该组合可以抑制蛋白质功能。如果您在添加蛋白质后的实验pH调节> 0.05 pH单位,则开始增加缓冲液的浓度(良好的缓冲液可以工作,最高可达50 mm)。

检查你的温度

您认为您将在生理温度(37°C)上进行试验吗?然后查找将在该温度下允许操作的缓冲区。在0°C工作?您可能需要一个不同的缓冲区。你的实验温度会波动吗?然后,您需要一个对这些更改那么敏感的缓冲区。例如,TRIS对温度变化非常敏感,改变缓冲液的pH(因此,您的实验)。

你的水中是什么?

这几乎是悲惨的 - 你在制造的高质量库存缓冲器上花了很多钱,以防止污染,但随后你倒入实验室水龙头中的水。坐在管道管道的水可以吸引污染物,溶解气体可以在您的实验上造成严重破坏。一个解决方案 - 在添加任何对实验之前,让水在一下进行一点。

那么,最好的缓冲区,那么,你将在你看的是什么,以及你如何操纵你的实验!以下网站可以帮助您校准您的pH并找到您的工作的最佳匹配:

http://chemwiki.ucdavis.edu/physical_chemisty/acids_and_bases/buffers.
http://www.science.smith.edu/departments/biochem/biochem_353/common_buffers.html.
http://www.reachdevices.com/protein/biologicalbuffers.html.
http://www.biomol.net/en/tools/buffercalculator.htm.

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