如何获得完美的琼脂糖凝胶
每个研究实验室都有自己的做法方式，有些是如此标准，没有多少关注他们。琼脂糖凝胶肯定是这种情况。
琼脂糖凝胶是生物实验室中的多功能工具;你用它们以检查质粒制剂DNA提取，PCR结果，新克隆......有这样琼脂糖凝胶的许多用途你经常不考虑运行它们的最佳方式。
但是，当你的凝胶的形象看起来不太漂亮时，你希望你在你开始并通过更彻底的方式开始之前乘以额外的五分钟。
去过也做过。以下是要考虑的事情的一些起点（最好在您开始之前，但如果您最终结束了可怕的凝胶图片，并且无法弄清楚为什么每次都会获得图片完美的凝胶。
琼脂糖凝胶故障排除的顶级提示
tbe或不是tbe：选择正确的缓冲区
最流行的缓冲液是tae（tris-醋酸酯-EDTA）和TBE（TRIS-BORATE-EDTA）。您需要缓冲器来准备凝胶并填充凝胶将运行的腔室。
一般来说，实验室往往更喜欢另一个，但很好地了解差异，因此您可以为您的特定凝胶运行做出适当的选择。选择缓冲区时需要考虑的几点包括：
- TAE最适合较大的DNA片段，而TBE最适合较小的DNA片段，因为它提供了更大的分辨率。
- Tbe具有更大的缓冲能力，建议更长的凝胶运行;然而，TBE中的硼酸盐是一种酶促抑制剂，所以如果您计划使用DNA以供任何下游申请TAE是可以走的方式。
- 随着时间的推移，TAE的股票更稳定，而TBE股票可以在几周内沉淀（提示：我通常使用TBE进行测定，所以我确保准备少量的5倍库存以避免降水）。
在为测定的目的选择最佳缓冲区时，请确保您考虑这些差异。
保持新鲜（缓冲区......）
在您决定哪些缓冲区最适合您的实验后，您应该总是有一个新鲜的等分试样，以准备凝胶并运行它。
通过新鲜，我的意思是新鲜稀释的缓冲液之前未使用过。可以保留5倍或10x缓冲液（在TAE的情况下更高）的库存，但确保在使用前稀释它。
不要重用以前的运行缓冲区 - 与必须再次运行整个实验以获得可用的图片，从未构成新鲜缓冲区的节省时间将可以忽略不计。当我只开始使用新鲜缓冲区时，我开始越来越尖锐，在我的样本中更均匀。耶！
让凝胶拿走它的时间
这是最重要的提示：不要急于琼脂糖凝胶！你不希望你美丽的克隆结果毁了一个可怕的画面，因为你匆忙。
你必须在凝胶在75V以下并确保缓冲区不会过热。您可以通过在运行前冷却缓冲器和/或凝胶来降低过热的风险，或在冷室内运行凝胶。
小心大凝胶：它们可能在中心温暖，而边缘很酷。涂抹的主要原因之一，不均匀的带是缓冲液的温度。您可以（并且应该）避免维持大约50V至75V的恒定电压。
介绍事项
请记住，您的结果只是您呈现它的方式。没有办法让你的老板说服坏凝胶图片只是因为片段“有了”。不要浪费你需要通过冲凝胶跑步来实现数据的时间！
您是否有琼脂糖凝胶故障排除的任何提示？在评论中与我们分享他们！
资源
- Voytas D.琼脂糖凝胶电泳。目前免疫学方案。1992; 2（1）：10.4.1-10.4.8
