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研究科学家CRISPR的权威指南

CRISPR研究中心为您带来Sigma-Aldrich®先进的基因组学

无论你是否需要帮助设计你的第一个CRISPR实验,你正在寻找故障排除技巧,或者你想学习如何将CRISPR应用于你的研究,CRISPR研究中心都有东西给你。

CRISPR以基因编辑工具而闻名,它可以让你轻松精确地编辑DNA在体外在活的有机体内

然而,CRISPR技术已经超越了基本的基因编辑,随着工具和技术的发展,您可以编辑表观基因组,甚至激活或抑制基因表达,而不改变目标基因的潜在DNA序列。

CRISPR上有如此多的信息,让人感觉难以承受。无论你想用CRISPR做什么,我们精心设计的资源都能让你找到并消化你需要的信息。

你的CRISPR完整指南
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    CRISPR解释

    CRISPR基因编辑是如何工作的?

    如果你是执行CRISPR的新手,或者你想要刷新你的背景知识,了解CRISPR基因编辑是如何工作的,这部分是为你准备的。你可以发现历史和了解这个基因编辑系统的组成部分,从原间隔相邻基序(PAMs)到引导RNA (gRNA)。如果您不确定CRISPR是否是适合您的实验的基因编辑系统,您可以将其与其他基因编辑系统进行比较,包括锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应核酸酶(TALENs)。

    两只手改变DNA以描述CRISPR基因组编辑

    CRISPR-Cas9基因组编辑工具简史

    了解CRISPR原核免疫应答系统是如何被首次发现的,以及CRISPR- cas9基因编辑工具的开发。

    两只手改变DNA以描述CRISPR基因组编辑
    科学家在CRISPR技术中编辑DNA的图像

    CRISPR技术解释:迈向CRISPR基因组!

    从CRISPR技术作为细菌防御系统的根源,到它如何在健康和研究中应用,我们来概述一下CRISPR技术。

    科学家在CRISPR技术中编辑DNA的图像
    Crispr

    CRISPR-Cas9基因组编辑:权衡利弊

    在你的研究中发现CRISPR作为基因组编辑工具的优缺点。

    Crispr

    先进CRISPR

    将CRISPR带入高级应用的下一个阶段

    如果你想做的不仅仅是基本的基因编辑,来吧,发现CRISPR技术的惊人适应。通过修改Cas9版本,您可以使用CRISPRa和CRISPRi进行表观基因组编辑并激活或抑制基因表达(而不改变DNA)。

    使用一种工具对DNA进行修饰,以表示修饰的CRISPR核酸酶格式

    如何理解CRISPR格式及其应用

    找出CRISPR核酸酶的变异是如何在减少脱靶效应的情况下提供基因编辑的,甚至可以在不改变DNA序列的情况下控制基因表达。

    使用一种工具对DNA进行修饰,以表示修饰的CRISPR核酸酶格式
    显示CRISPR如何利用CRISPRa和CRISPRi修饰基因表达的DNA转录图像

    为什么你应该考虑把CRISPRa和CRISPRi加入你的工具箱

    找出CRISPR介导的基因激活(CRISPRa)和抑制(CRISPRi)是如何工作的,以及为什么你应该考虑在敲除CRISPR的同时使用它们。

    显示CRISPR如何利用CRISPRa和CRISPRi修饰基因表达的DNA转录图像
    一个描述CRISPRa如何允许你打开基因表达的电灯开关

    CRISPR-Based Activation (CRISPRa):一个操作指南

    CRISPRa允许你以一种更内源性的方式激活或过表达基因。找出开始的步骤。

    一个描述CRISPRa如何允许你打开基因表达的电灯开关
    一个手持扳手的僵尸来描述死去的Cas9对表观基因组编辑的有用性

    非常有用:CRISPR-Cas9表观基因组编辑

    想做一些表观基因组编辑吗?发现催化失活(死)Cas9的用处。

    一个手持扳手的僵尸来描述死去的Cas9对表观基因组编辑的有用性

    CRISPR应用程序

    发现CRISPR的各种应用

    你心中是否有CRISPR的具体应用,并正在寻求帮助和指导?探索这项技术在研究中使用的各种方式,了解如何在特定应用中使用它的内部技巧,例如在难以转染的细胞(如T细胞)中进行CRISPR实验。我们还揭示了扩大CRISPR屏幕需要知道的东西。

    微孔板显示CRISPR如何被放大以进行CRISPR筛选。

    用CRISPR提高药物筛选水平

    了解CRISPR如何扩大药物筛选应用。

    微孔板显示CRISPR如何被放大以进行CRISPR筛选。
    T细胞和癌细胞的图像突出显示了CRISPR是如何被用来增强T细胞抗癌能力的。

    CRISPR技术应用于免疫肿瘤学

    用CRISPR来改造T细胞是很棘手的。找出编辑这些单元格时的关键考虑因素,以及如何克服任何相关挑战。

    T细胞和癌细胞的图像突出显示了CRISPR是如何被用来增强T细胞抗癌能力的。
    CRISPR研究中心

    多重CRISPR基因编辑的作用是什么?

    如果你需要多基因敲除或大规模的基因组修改,或想要减少脱靶效应,那么多重CRISPR就是为你准备的!

    CRISPR研究中心
    果蝇的CRISPR-Cas9编辑图像

    果蝇CRISPR-Cas9编辑速成班

    获取在果蝇中执行CRISPR-Cas9编辑的提示和技巧。

    果蝇的CRISPR-Cas9编辑图像

    实验设计

    设置CRISPR实验的提示和技巧

    你准备好在你的实验室开始CRISPR了吗?本节将带您了解CRISPR实验设计和设置的各个方面,从设计grna到选择传递CRISPR试剂的正确方法。我们还介绍了各种交付格式,包括DNA、质粒和核糖核蛋白(RNP)复合物,并建议您如何为您的实验选择正确的交付格式。

    CRISPR-Cas复合体与gRNA靶向DNA的图像

    CRISPR基因编辑:考虑和开始

    通过我们的关键考虑,了解如何在您的实验中开始CRISPR基因编辑。

    CRISPR-Cas复合体与gRNA靶向DNA的图像
    用室内设计的形象来表现如何设计CRISPR实验

    如何设计CRISPR实验并开始基因组编辑

    设计CRISPR实验可能是令人生畏的。我们有一些小贴士和指示来帮助你顺利起步。

    用室内设计的形象来表现如何设计CRISPR实验
    微注射作为一种传递CRISPR的方法的图像

    让CRISPR试剂进入细胞的四种方法

    仔细阅读传递CRISPR试剂的各种方法以及如何在它们之间进行选择。

    微注射作为一种传递CRISPR的方法的图像
    这条路展示了CRISPR的起步之路

    CRISPR基因组编辑:你需要知道的入门知识

    了解一下CRISPR能为你做什么,使用它会涉及到什么。

    这条路展示了CRISPR的起步之路

    故障排除

    CRISPR出错时的故障处理帮助

    如果你的实验一直出错,或者你得到了无法解释的结果,不要惊慌。我们提供了一些指南,指导您如何排除CRISPR实验中的故障,包括您需要使用哪些控制来确保您能够有效地排除故障,以及如何解释令人困惑的结果。

    用于描述CRISPR验证的测序数据图像

    如何验证CRISPR实验

    了解如何验证您的CRISPR基因编辑,从成功交付CRISPR试剂到确认所需的遗传和表型变化。

    用于描述CRISPR验证的测序数据图像
    Valid这个词用来强调决定CRISPR成功的重要性

    如何确认你的CRISPR-cas9基因组编辑成功

    通过确定CRISPR实验的每个阶段的成功和失败,提升您的故障排除能力。

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    最新CRISPR文章

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    一个穿得像侦探的侦探象征着DETECTR和SHERLOCK CRISPR病毒诊断方法。

    CRISPR如何用于检测新出现的病毒病原体

    探索两种基于crispr的病毒诊断策略,DETECTR和SHERLOCK。

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    CRISPR术语

    CRISPR术语表

    有没有一个CRISPR术语你不太确定?我们整理了一份CRISPR术语表来帮助你。只要点击术语旁边的箭头就可以看到定义。

    CRISPR-associated蛋白质。这是CRISPR复合体的核酸酶成分,这些蛋白质中最常见的是Cas9。

    CRISPR相关蛋白.几种已确定的CRISPR核酸酶之一。Cas9核酸酶是应用最广泛的CRISPR核酸酶。Cas9在不同的物种中有不同的变异。被识别的PAM序列在Cas9变体之间是不同的。

    CRISPR从普氏菌弗朗西斯氏菌属1.CRISPR内切酶现在更常用的名字是Cas12a。Cas12a与Cas9有几个不同之处:它更小、更简单,它产生交错而不是钝性切口,它使用不同的PAM,并在识别位点的远端切割。这些差异使它成为Cas9的一个有用的替代方案。

    聚集,有规律间隔,短回文重复.CRISPR技术首次被识别的序列的名字。现在用来指使用CRISPR核酸酶的基因编辑系统。

    CRISPR激活.一种利用非催化Cas9 (dCas9)将转录激活物靶向于特定的DNA/基因以激活靶基因表达的技术。

    CRISPR抑制.一种利用非催化Cas9 (dCas9)将转录抑制因子靶向于特定的DNA/基因以抑制靶基因表达的技术。

    CRISPR RNA.一种gRNA的组成部分,包含可变的靶向序列,负责CRISPR复合物对靶DNA的特异性。

    催化地死Cas9.这是Cas9的一种催化失活形式,由两个内切酶域(RuvC和HNH)的点突变产生。这些点突变是D10A和H840A,使核酸酶不能切割DNA。在gRNA的帮助下,核酸酶仍然可以靶向特定的DNA,并经常与转录或表观遗传调控因子结合来修饰基因表达。

    供体DNA在CRISPR中使用同源定向修复(HDR)时需要。HDR允许精确的基因编辑,比如特定的插入和删除或碱基替换。

    双链断裂.这是DNA分子的两条链被切断,留下一个完整的断裂。

    增加的功能.这是指通过突变/基因编辑赋予的附加功能或增强的当前功能。这可以指激活或增加基因/非编码RNA (ncRNA)的表达。

    指导RNA.这是一种以核酸酶为目标的RNA,以特定的DNA序列为目标。gRNA由支架RNA (tracrRNA)和可变靶向RNA (crRNA)组成,既可以作为两个独立的RNA,也可以作为一个单一的引导RNA,其中两个成分融合在一起。

    Homology-directed修复是两种细胞DNA修复途径之一。HDR可用于需要非常精确的基因编辑的CRISPR基因编辑,包括特定的插入和删除,或碱基替换。在修复过程中,需要供体DNA作为模板。

    损失函数.它描述了一种突变或基因编辑,导致蛋白质或ncRNA的天然功能的丧失。在CRISPR基因编辑中,这可以指蛋白/ncRNA表达的缺失/减少或非活性形式的表达(例如,缺失活性结构域的截断蛋白)。

    CRISPR nickas。这些是Cas9的改良形式,在两个核酸内切酶结构域之一发生点突变,导致它们“切割”一条DNA链,而不是完全的双链断裂。两个nickase配对在一起以产生所需的双链断裂。配对的镍酶有效地消除脱靶效应,因为不同的grna与每个镍酶使用。

    异源end-joining是两种细胞DNA修复途径之一。NHEJ是CRISPR基因编辑中更常用的途径,因为它比HDR更有效。然而,NHEJ也比HDR更容易出错。

    Protospacer-adjacent主题。靶位点下游的~ 3-8个核苷酸序列,是核酸酶成功切割靶DNA所必需的。不同的核酸酶识别不同的PAM序列。

    核糖核蛋白复杂。一种由CRISPR核酸酶蛋白和gRNA组成的复合物,可以被输送到细胞中。

    Single-guide RNA.一种常见的gRNA格式,其中tracrRNA和crRNA融合成一个单一的RNA分子。

    Trans-activating CRISPR RNA.在crRNA和核酸酶之间起支架作用的gRNA的组成部分。

    有问题或建议吗?

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